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近日，國家藥監(jiān)局正式發(fā)布行業(yè)標(biāo)準《核酸提取試劑盒（磁珠法）》YY/T 1717-2020。此標(biāo)準對核酸提取試劑盒（磁珠法）的分類、技術(shù)要求、試驗方法等進行了相關(guān)規(guī)范，填補了該領(lǐng)域標(biāo)準空白，對于分子診斷行業(yè)產(chǎn)品的長遠發(fā)展、以及現(xiàn)階段新冠疫情防控有著重要意義。
在分子診斷領(lǐng)域，核酸提取是實驗中最基本、最重要的環(huán)節(jié)，關(guān)系著分子實驗的成敗。磁珠法只是核酸提取方法之一，下面就讓我們來了解一下核酸提取的原理和各種方法吧～
一
核酸抽提原理
二
核酸提取方法
苯酚和氯仿均為有機溶劑，其萃取核酸原理是苯酚與氯仿對于與核酸結(jié)合的蛋白質(zhì)有極強的變性作用，但對核酸本身沒有影響。經(jīng)離心后，形成上層水相下層酚/氯仿相，變性后的蛋白質(zhì)溶于酚/氯仿相或者在兩相交界處形成凝膠層，而核酸易溶于水而不溶于有機溶劑從而留在水相；同時，氯仿可以有助于有機相與水相的分離和去除溶于水的部分酚。最后，再將核酸通過乙醇沉淀即可達到提取的目的。
此法的缺點是：
蛋白質(zhì)難以徹底去除；
操作難度大且費時；
使用危險化學(xué)品。
樣本中加入促細胞裂解的化學(xué)物質(zhì)（SDS、Tween 20等），可加入蛋白酶K消化一段時間，也可不加，95℃以上加熱10分鐘左右；高速離心，上清中的DNA即可用于PCR擴增。該方法操作簡便，成本低，一般僅用于血清或體液中病原體核酸的提取。
此方法在臨床應(yīng)用廣泛，但缺點是：
核酸純度低，產(chǎn)量低；
提取出的核酸除了PCR外不能直接用于其它分子生物學(xué)操作。
此種方法是利用核酸表面會覆蓋一層由水分子構(gòu)成的薄膜，在高鹽環(huán)境下，這層親水膜會遭到破壞從而核酸可被吸附在離心柱上，而其他雜質(zhì)如蛋白質(zhì)、代謝產(chǎn)物等則會被離心沉淀與核酸分離。最后通過洗脫，將核酸從吸附膜上脫離，即可得到純化后的核酸。這也是試劑盒提取中廣泛使用的方法。
但即便如此，該方法仍存在缺點：
高度依賴吸附膜的結(jié)合能力；
洗脫不完全導(dǎo)致核酸流失；
無法大量提取核酸，較難實現(xiàn)自動化。
攜帶正電荷的磁珠易于吸附負電荷的核酸，主要用于從人血清或血漿樣品中提取DNA 和RNA（例如從血液樣本中檢測HIV 或HBV 病毒基因組的樣品制備）。一般而言，將樣品與結(jié)合緩沖液和磁珠混合，核酸與磁珠結(jié)合后，經(jīng)過數(shù)次洗滌與磁場捕獲，洗脫下來的核酸即可通過PCR或其它特定方法來檢測特定的DNA或RNA。磁分離法也是廣泛應(yīng)用于診斷行業(yè)，且能實現(xiàn)高通量、自動化的核酸提取方法。
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